，洗脱2次，每次1.5mL，合并洗脱液到一干净的10mL培养管中。

　　D.7.1.19 在氮气流下，用温度约60℃的沙浴蒸发去除乙腈至约为0.5mL。

　　D.7.1.20 转移至1mL锥形瓶中。用0.5mL乙腈洗涤10mL培养管，旋涡混合5s，并将洗涤液加到1mL锥形瓶中。在60℃用氮气流吹干。

　　注意：从这儿开始要防潮。

　　D.7.1.21 向干的残留物中加200μL Sylon HTP。

　　D.7.1.22 盖塞并旋涡混合5s。在60℃－70℃沙浴中反应15min。

　　D.7.1.23 在60℃用氮气流吹干去除多余的试剂蒸发至10μL。

　　注意：此步过长的吹干时间可导致丢失分析物。 D.7.1.24 将残留物重新溶于100μL环已烷－正已烷（6＋4）中，旋涡混合5s。

　　D.7.1.25 注入适量微升体积的衍生物到气相色谱仪作定量测定。

　　D.7.2 测定条件

　　D.7.2.1 色谱柱：DB－1，30m×0.254mm i.d.。

　　D.7.2.2 载气：氦气，线性速度29cm/s。

　　D.7.2.3 初始柱温：80℃，维持1min。

　　D.7.2.4 温度程序：设定30℃／min升至260℃，维持10min或直到对位异构体和氯霉素已经流出。然后设定30℃／min升至300℃，维持5min以确保所有的样品已经流出。

　　D.7.2.5 进样室温度：280℃。

　　D.7.2.6 检测器温度350℃。

　　D.7.2.7 预期保留时间：氯霉素10min-11min，异氯霉素9.5min-10.5min。

　　D.7.2.8 预期响应值：对0.2ng氯霉素可以达到50％全刻度。

　　D.7.2.9 进样量：适量。

　　D.7.3 样品测定

　　分别注入适量标准工作溶液及适当浓度的样品溶液于气相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析。响应值均应在仪器检测的线性范围之内。

　　D.7.4 计算

　　用色谱数据处理机或按式（D.1)计算试样中氯霉素残留量：

　　W＝H·CS／HS·C………………………………（D.1)

　　式中：

　　W－试样中氯霉素残留量，单位为微克每克（μg/g)；

　　H－试样液中氯霉素的峰高，单位为毫米（mm)；

　　Hs－标准工作液中氯霉素的峰高，单位为毫米（mm)；

　　CS-标准工作液中氯霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；

　　C－最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g/mL)。

　　注：计算结果需扣除空白值。

　　附 录 E

　　（规范性附录）

　　磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法

　　E.1 适用范围

　　本方法用于测定动物可食性组织中磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基