冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇稀释成浓度为100μg/mL的内标液。

　　D.6.3 0.1mol/L KH2PO4和Na2HPO4的缓冲液（pH6.8±0.1)：用相应的干试剂调节pH为6.8。

　　D.6.4 β-葡萄糖醛酸酶－IX：用缓冲液稀释至4000单位／mL。

　　D.6.5 Sylon HTP溶液：六甲基二硅烷（HMDS）3份，氯化三甲基硅烷1份，吡啶9份。

　　D.7 分析

　　D.7.1 提取和纯化

　　D.7.1.1 将组织解冻，称取肌肉组织10g（精确到0.1g），置于50mL玻璃离心管中。向每个样品中加100μL异氯霉素内标液（100μg/mL）。

　　D.7.1.2 每个分析样品配制1个空白、3个添加样品。向空白组织中加内标。回收率样品中加工作液，制成0.5mL/L（50μL工作液），1.0mL/L(100μL工作液），2.0mL/L(200μL工作液）的样品。由添加样品得到的数据用于计算。

　　D.7.1.3 向所有空白、添加对照和样品管中加15mL磷酸盐缓冲液（pH6.8±0.1)和200μL－β-葡萄糖醛酸酶（800单位），在室温条件下混合30s-60s。

　　D.7.1.4 将所有管置于37℃保温90min。保温后，样品可以放在冰箱中过夜。

　　D.7.1.5 样品放回室温平衡。向各管加乙酸乙酯15mL，旋涡混合30s提取氯霉素。

　　D.7.1.6 2000r/min的速度离心2min。

　　D.7.1.7 用一次性滴管吸取乙酸乙酯液（上层）留用并转移到另一干净的50mL离心管中。

　　D.7.1.8 重复（步骤D.7.1.5-D.7.1.7)提取样品，并合并提取液。

　　D.7.1.9 在氮气流下，用温度约60℃的沙浴去除乙酸乙酯使体积约为1mL。

　　D.7.1.10 向各管加4％氯化钠溶液4mL，混合5s-10s。

　　D.7.1.11 继续蒸发去除乙酸乙酯至乙酸乙酯层干，剩下小量的油性残留物。

　　D.7.1.12 向4％氯化钠溶液层加正已烷4mL，混合10s。2000r/min的速度离心1min，弃掉上层。

　　D.7.1.13 重复步骤D.7.1.12。

　　注意：以下步骤D.7.1.14至步骤D.7.1.17必须立即连续做完。切莫让吸附剂变干。

　　D.7.1.14 给每个样品、空白和添加对照准备一根C18柱，顺序用5mL甲醇、5mL三氯甲烷、5mL甲醇和10mL水洗涤C18柱。弃掉洗涤液。

　　D.7.1.15 用一次性巴氏吸管吸取全部水相溶液装入C18柱过柱，弃掉流出液。

　　D.7.1.16 用1mL水混合淋洗样品管2遍，并将淋洗液加入C18柱过柱，弃掉流出液。

　　D.7.1.17 用1mL水，然后2mL甲醇－水（2＋8）洗涤C18柱。让最后一次洗涤液完全流出C18柱。弃掉洗液。

　　D.7.1.18 用乙腈将C18柱中的氯霉素洗脱