。

　　C.7.2.4 检测波长：350nm。

　　C.7.2.5 进样量：10μL。

　　C.7.3 样品测定

　　分析样品按上述仪器作条件供高效液相色谱仪分析。

　　C.7.4 计算

　　用色谱数据处理机或按式（C.1)计算试样中土霉素残留量：

　　W＝H·CS／HS·C………………………………（C.1)

　　式中：

　　W－试样中土霉素残留量，单位为微克每克（μg/g)；

　　H－试样液中土霉素的峰高，单位为毫米（mm)；

　　Hs－标准工作液中土霉素的峰高，单位为毫米（mm)；

　　CS-标准工作液中土霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；

　　C－最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g/mL)。

　　注：计算结果需扣除空白值。

　　附 录 D

　　（规范性附录）

　　氯霉素残留的气相色谱测定法

　　D.1 适用范围

　　本方法用于测定肉牛的肌肉组织中氯霉素的残留量。

　　D.2 原理

　　组织经β-葡萄糖醛酸酶消化，经乙酸乙酯提取，然后将乙酸乙酯浓缩。加4％氯化钠溶液，剩余的乙酸乙酯用氮气吹干。将盐溶液过C18萃取小柱，用20％甲醇洗涤，用甲醇洗脱。将洗脱液蒸发至干并固化，用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定氯霉素。异氯霉素做内标物定量。

　　D.3 可靠的检测限

　　本方法在牛肌肉组织的检测限为1.0ng/g。

　　D.4 仪器

　　D.4.1 气相色谱仪，配电子捕获检测器（63Ni）。

　　D.4.2 电子天平：感量0.00001g。

　　D.4.3 匀浆机。

　　D.4.4 离心机。

　　D.4.5 旋转蒸发仪。

　　D.4.6 振荡器。

　　D.4.7 电热恒温水浴锅。

　　D.4.8 固相萃取柱：C18柱。

　　D.5 药品与试剂

　　D.5.1 氯霉素标准品：纯度≥99％。

　　D.5.2 异氯霉素标准品：内标物。

　　D.5.3 β-葡萄糖醛酸酶－IX：生化试剂。

　　D.5.4 甲醇：分析纯。

　　D.5.5 乙酸乙酯：分析纯。

　　D.5.6 正已烷：分析纯。

　　D.5.7 三氯甲烷：分析纯。

　　D.5.8 乙腈：色谱纯。

　　D.5.9 环已烷：分析纯。

　　D.5.10 氯化钠：分析纯。

　　D.6 溶液

　　D.6.1 氯霉素标准液：准确称取氯霉素50mg，用甲醇溶解，使成浓度为500μg/mL的标准储备液，置4℃冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇稀释成浓度为100μg/mL的标准工作液。

　　D.6.2 异氯霉素标准液：准确称取异氯霉素50mg，用甲醇溶解，使成浓度为500μg/mL的标准储备液，置4℃