确称取适量盐酸土霉素标准品，用甲醇配成浓度为100μg/mL的标准储备液，置冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次稀释成浓度为5.0、0.2、1.0、0.5、0、25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。

　　C.6.2 MCI－Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO428.41g,用水溶解，定容于1000mL,容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，简称溶液B。取625mL溶液A和1000mL溶液B混匀，调节pH至4.0±0.05。

　　C.6.3 MCI－Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI－Vaine液中，使成含0.01mol/L Va2EDTA的MCI－Vaine液。

　　C.6.4 0.01mol/L草酸甲醇：准确称取草酸1.26g，甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。

　　C.6.5 0.01mol/L草酸溶液:准确称取草酸1.26g，水溶解并定容于1000mL容量瓶中。

　　C.7 分析

　　C.7.1 提取和纯化

　　C.7.1.1 称取5.00g组织匀浆（精确到0.1g）放入50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。

　　C.7.1.2 加20mL MCI－Vaine-Na2EDTA液,盖上帽，漩涡半分钟，手摇5min。

　　C.7.1.3 以4500r/min的速度离心10min，上清液倒入另一离心管，再加20mL MCI－Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。

　　C.7.1.4 以4500r/min的速度离心5min，上清液倒入另一离心管，再加10mL MCI－Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。

　　C.7.1.5 以4500r/min的速度离心5min,混合全部上清液（共50mL)，以4500r/min的速度离心10min。

　　C.7.1.6 用MCI－Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸，用较小真空（水泵）过滤上清液，2×2ml MCI－Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶并过滤。

　　C.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水冲洗，之后将过滤的液体倒入50mL注射器中，用2×2ml MCI－Vaine-Va2EDTA液洗抽滤瓶并放入注射器中。

　　C.7.1.8 C18微柱，使TCS药物吸附在C18微柱上。

　　C.7.1.9 用20mL 水冲洗抽滤瓶倒入注射器中，并过滤，水洗C18微柱。

　　C.7.1.10 用水冲洗完全后，顶空5min。

　　C.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。

　　C.7.1.12 上述液用滤膜过滤后，供高效液相色谱仪进行检测。

　　C.7.2 测定条件

　　C.7.2.1 色谱柱：C18柱。

　　C.7.2.2 流动相：甲醇－乙腈－0.01mol/L草酸（1.5+1.5+2.5)。

　　C.7.2.3 流速：1.5mL/min