水定容至刻度。

　　B.7.1.12 上述液用滤膜过滤后，上高效液相色谱仪进行检测。

　　B.7.2 测定条件

　　B.7.2.1 色谱柱：C18柱。

　　B.7.2.2 流动相：甲醇－乙腈－0.01mol/L草酸（1.5+1.5+2.0,pH=2.0)。

　　B.7.2.3 流速：1.5mL/min。

　　B.7.2.4 检测波长：350nm.

　　B.7.2.5 进样量：10μL。

　　B.7.3 样品测定

　　分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。

　　B.7.4 计算

　　用色谱数据处理机或按式（B.1）计算试样中金霉素残留量：

　　W＝H·CS／HS·C………………………………（B.1)

　　式中：

　　W－试样中金霉素残留量，单位为微克每克（μg/g)；

　　H－试样液中金霉素的峰高，单位为毫米（mm)；

　　Hs－标准工作液中金霉素的峰高，单位为毫米（mm)；

　　CS-标准工作液中金霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；

　　C-最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g/mL)。

　　注：计算结果需扣除空白值。

　　附 录 C

　　（规范性附录）

　　土霉素残留的高效液相色谱测定法

　　C.1 适用范围

　　本方法用于测定动物可食性组织中土霉素的残留素。

　　C.2 原理

　　组织经MCI－Vaine-Na2EDTA缓冲液（pH4.0)提取，过滤后，通过C18微柱水洗后，用草酸甲醇将药物洗 脱，洗脱液用高效液相色谱仪进行检测。

　　C.3 可靠的检测限

　　本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg/g。

　　C.4 仪器。

　　C.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。

　　C.4.2 匀浆机。

　　C.4.3 离心机。

　　C.4.4 漩涡混合器。

　　C.4.5 自动电位滴定计。

　　C.4.6 磁力加热搅拌器。

　　C.4.7 C18微柱。

　　C.4.8 布氏漏斗。

　　C.4.9 球形漏斗。

　　C.4.10 滤膜：0.45μm。

　　C.4.11 抽滤瓶。

　　C.5 药品和试剂

　　C.5.1 盐酸土霉素标准品：纯度≥90％。

　　C.5.2 乙腈：色谱纯。

　　C.5.3 甲醇：分析纯。

　　C.5.4 乙酸铵：分析纯。

　　C.5.5 柠檬酸：分析纯。

　　C.5.6 依地酸二钠：分析纯。

　　C.5.7 磷酸氢二钠：分析纯。

　　C.5.8 草酸：分析纯。

　　C.5.9 三氟乙酸：分析纯。

　　C.5.10 N，N－二甲基甲酰胺：分析纯。

　　C.5.11 草酸铵：分析纯。

　　C.5.12 磷酸氢二铵：分析纯。

　　C.6 溶液

　　C.6.1 土霉素标准液：准