复提取2次,离心后会并提取液,用旋转蒸发仪(60℃)将提取液浓缩蒸去乙腈,向残留物中添加10mL水,摇匀。
C18预柱依次用4mL乙腈和4mL水-乙腈溶液平衡,使样品液通过C18柱(1mL/min),吹去柱内残留的液体,用5mL乙腈洗脱柱内吸附的伊维菌素,用旋转蒸发仪蒸去溶剂。向残留物中依次加入150μL三氟乙酸酐-乙腈溶液和100μL N-甲基咪唑-乙腈溶液,经经摇匀后密闭、避光存放,30s后即可供高效液相色谱仪测定。
F.7.2 测定条件
F.7.2.1 色谱柱:C18柱,150mm×4.6mm i.d.,粒度5μm。
F.7.2.2 流动相:甲醇-水(95+5)。
F.7.2.3 流动相流速:1.5mL/min。
F.7.2.4 荧光检测:激发波长364nm,发射波长470nm。
F.7.2.5 进样量:10μL。
F.7.3 样品测定
将分析样品按上述操作条件供高效液相色谱仪分析。
F.7.4 计算
用色谱数据处理机或按式(F.1)计算试样中伊维菌素物残留量:
W=H·CS/HS·C………………………………(F.1)
式中:
W-试样中伊维菌素残留量,单位为微克每克(μg/g);
H-试样液中伊维菌素峰高,单位为毫米(mm);
Hs-标准工作液中伊维菌素峰高,单位为毫米(mm);
CS-标准工作液中伊维菌素浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
C-最终试样液所代表的试样的浓度,单位为克每毫升(g/mL)。
注:计算结果需扣除空白值。